Прошлые записи

Альтернативный подход

Альтернативный подходВ комбинации с ПЦР ПОНК применялась для выявления устойчивости к рифампицину, изониазиду, стрептомицину и ципрофлоксацину. Впоследствии Преториус с соавт. применяли ПЦР-ПОНК для экспресс-выявления устойчивости к рифампицину в клинических изолятах М. Tuberculosis; таким образом удалось выявить 95% устойчивых изолятов. Скарпеллини с соавт. также использовали ПЦР-ПОНК для выявления устойчивости к рифампицину в образцах ликвора, верно определив фенотип по чувствительности к рифампицину у всех из обследованных больных.

Как и автоматическое секвенирование, автоматизированный ПОЦК подходит скорее для крупных референс-лабораторий в развитых странах. Был предложен и альтернативный подход, основанный на окрашивании серебром, который, возможно, удастся внедрить в лабораториях с ограниченными ресурсами.

Это исследование, описанное Вильямсом с соавт. , выполняется следующим образом: амплифицированная ДНК от исследуемых микроорганизмов и чувствительных контрольных штаммов смешивается для получения гибридной комплементарной ДНК. Если присутствует устойчивый штамм, мутация вызовет образования гетеродуплекса с иной подвижностью при электрофорезе, чем гомодуплексный гибрид. ПЦР — ОГД была применена для выявления устойчивых к рифампицину штаммов с мутациями на участке гена гроВ из 305 оснований. Исследование не требует радиоактивных соединений и может найти применение в клинических лабораториях. Впоследствии Вильямс с соавт. использовали однопробирочную полугнездовую амплификацию ПЦР с образованием специфичного для М. Tuberculosis фрагмента гена ГроВ, который превращается в синтетический универсальный генератор гетеродуплексов, полученный из участка гена ГроВ, где имеют место мутации, кодирующие устойчивость к рифампицину.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Популярное

Copyright © 2015. All Rights Reserved.