Прошлые записи

Кластер генов

Кластер геновМы создали подобную связку промоторов из кластера генов, индуцируемых изониазидом. Исходно он был выделен путем скрининга белков, синтез которых повышался после введения препарата, что оценивалось по включению “Б-метионина. Этот результат был впоследствии подтвержден путем гибридизации микроматриц ДНК, что указывало на регуляцию на уровне РНК — трансприпта. Было показано, что этот оперон кодирует группу из пяти белков, транскрипция которых согласованно повышалась после введения изониазида. Участок промотора ближайшего к З’-концу из этих генов был амплифицирован ПЦР и клонирован после гена luc, полученного от светляка. Выделение света этим репортером специфически индуцировалось при введении изониазида, а также — других ингибиторов синтеза миколевых кислот, таких как этионамид, но не препаратов, нарушающих синтез клеточной стенки вообще, таких как этамбутол. Этот штамм был использован в разработке и практической реализации системы проверки ингибиторов синтеза миколевых кислот на пластине с 96 лунками, обладающей высокой пропускной способностью.

Применяя методики твердофазной и комбинаторной химии, в настоящее время возможно создавать сотни тысяч аналогов фармакофора, в то время как ранее удавалось перебрать лишь сотни или тысячи. Расширение возможностей трехмерного сопоставления ингибитора с ферментом позволило разработать мощнейшие препараты, чьи константы ингибирования составляют порядка нескольких наномолей — что от ста до тысячи раз ниже, чем у существующих антимикобактериальных препаратов первого ряда. Очевидно, что такое снижение МПК позволит не только изменить терапевтическую дозировку, но и уменьшить продолжительность лечения. Эта технология важна для оптимизации существующих серий базовых структур, а также — для открытия новых молекул. Процесс усовершенствования базовой структуры можно корректировать путем использования матриц, которые подтверждают, что оптимизируется требуемый вид токсичности, и что эта оптимизация ограничена определенным путем метаболизма.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Популярное

Copyright © 2015. All Rights Reserved.