Прошлые записи

Невирулентный штамм

Невирулентный штаммБыло предложено два варианта использования систем-репортеров. Во-первых, Кукси с соавт. описали сооружение плазмид устойчивости, содержащих ген люциферазы светляка, которые вводились в невирулентный штамм М. Tuberculosis. Образование света определялось через 48 часов после инкубации трансформированного штамма в присутствии препаратов или без них. Позднее Эрейн с соавт. использовали штаммы-репортеры А/. Tuberculosis И А/, Bovis BCG с эндогенной экспрессией люциферазы для определения активности рифампицина и изониазида. Они также разработали стандартизованную систему для биолюминесцентного исследования нескольких препаратов, в т. ч. изониазида, этамбутола, рифампицина, амикацина, стрептомицина и ципрофлоксацина. Значения МП К коррелировали с определенными традиционным методом в системе ВАСТЕС® . Хикли с соавт. использовали улучшенную разновидность микобактерий с экспрессией люциферазы для прямой оценки антимикобактериальной активности на мышах. Впоследствии Шавар с соавт. использовали рекомбинатные штаммы М. Bovis BCG и М. Intracellulare В мини-пробирке с 96-лунками для определения антимикобактериальной активности вытяжек из естественных продуктов.

Другой подход к созданию систем-репортеров заключается в применении фагов в качестве носителей гена люциферазы. К примеру, Джейкобс с коллегами клонировали ген люциферазы в геноме микобактериофагов и добились его экспрессии у М. Tuberculosis‘, ИЛЧ проводилось путем оценки образования света жизнеспособными микобактериями, инфицированными фагом. Свет можно было обнаружить через несколько минут после инфицирования. Выращивание чувствительных штаммов А/, Tuberculosis В присутствии рифампицина или изониазида приводило к исчезновению светового сигнала. Та же группа внесла в систему изменения, применив другой фаг, который дает световой сигнал повышенной интенсивности и продолжительности, что позволяет определить активность препарата за один день. Благодаря еще одному изменению, испускаемый штаммом свет можно обнаружить с помощью специально изготовленной кассеты Полароид®, т. н. кассеты Бронкс.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Популярное

Copyright © 2015. All Rights Reserved.