Прошлые записи

Третичная структура

Третичная структураСеквенирование ДНК из продуктов амплификации ПЦР стало наиболее широко распространенной методикой выявления лекарственной устойчивости М. Tuberculosis, золотым стандартом в этой области. Проводилось оно как вручную, так и автоматически, причем последний способ получил наибольшее распространение. Капур с соавт. описали применение автоматизированного секвенирования ДНК для определения мутаций гена ГроВ У рифампицин-устойчивых штаммов М. Tuberculosis и для экспресс — идентификации М. Tuberculosis и видов Mycobacterium. Впоследствии Паи с соавт. подтвердили практическую полезность этой методики для видовой идентификации микобактерий и суррогатного исследования чувствительности к рифампицину в больничной клинической лаборатории, где удалось правильно предсказать фенотип по чувствительности к рифампицину для всех исследованных штаммов. Автоматизированное секвенирование ДНК также использовалось для выявления мутаций, вызывающих устойчивость к изониазиду, ципрофлоксацину и стрептомицину.

Метод ПЦР-ПОНК основан на свойстве однонитевой ДНК образовывать третичную структуру, форма которой зависит от ее последовательности. Одинарные цепи ДНК, отличающиеся лишь одним или несколькими основаниями, будут образовывать различные конформации с различной подвижностью в геле, формируя т. н. полиморфизмы однонитевой конформации. После ПЦР-амплификации интересующего нас участка ДНК амплифицированные цепи разделяются тепловой денатурацией, а затем охлаждаются, что позволяет одинарным цепям ДНК образовать характерную конформацию, подвижность которой определяется в ходе электрофореза на геле.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Популярное

Copyright © 2015. All Rights Reserved.